"基因合成" 人工合成目的基因的方法
质粒是病原体体内小于性染色体的环状DNA。这种环状DNA中只有大量的基因,可以随意进出病原体的体细胞。
1973年,美国斯坦福大学的专家教授科恩从大肠杆菌中提取了两种不同的质粒。科恩“切掉”这两种耐药基因,它们分别有一个耐药基因,然后将这两个基因“拼凑”成一个新的质粒,称为“杂交质粒”。
当这种“杂交质粒”进入大肠杆菌时,大肠杆菌可以抵抗两种治疗药物,这种大肠杆菌的后代具有双向耐药性,这意味着当大肠杆菌细胞分裂时,杂交质粒可以自我复制。意味着基因工程技术的第一次胜利。
制造人工基因有两种方法:
1.基因工程技术。
定义:基因工程技术是指根据每个人的意愿进行严格的设计方案,根据体外的DNA重组和转基因技术,赋予微生物新的遗传特性,创造更符合每个人需求的新的微生物种类和微生物商品。基因工程技术又称DNA重组技术,在DNA分子水平上进行设计方案和工程建设。
基因工程技术的基本原理和技术特点
基本原理:基因重组
第一步:获得目标基因
1.靶基因是指编号蛋白的结构基因。
2.原核基因是马上分离出来的,真核基因是人工的。人工靶基因的常见方式有逆转录和有机合成。
3.聚合酶链反应技术增加了目标基因
基本原理:DNA的双链拷贝
整个过程:第一步:加热至90 ~ 95℃进行DNA熔化;第二步:冷却至55-60℃,将引物融合到互补DNA链上;第三步:加热至70 ~ 75℃,热稳定的DNA聚合酶从引物开始和结束互补链的形成。
第二步:基因表达载体的构建
1.目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并能遗传给下一代,使目的基因得以表达和充分发挥。
2.组成:目的基因启动子终止子标记基因
第三步:将目标基因导入受体细胞
1.转化的概念:是靶基因进入受体细胞并在受体细胞中保持稳定表达的全过程。
2.常见的转换方法:
将目的基因导入植物细胞:农杆菌转化是最流行的方法。
将目的基因导入动物细胞:最常见的方法是显微注射技术。这种方式的大多数受体细胞是精子-卵子结合。
3.将重组细胞导入受体细胞后,选择具有遗传表达载体的受体细胞是基于标记基因是否表达。
第四步:目标基因的测试和表达
1.首先要检查目的基因是否插入转基因生物的性染色体DNA,途径是选择DNA分子杂交技术。
2.其次要检查目的基因是否转录mRNA,方式是选择标记的目的基因作为探针,与mRNA混合。
二.蛋白质项目
1.定义:蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律性和微生物作用的关联性为基本,根据基因改造、
或者是基因合成,更新改造当前的蛋白质,或者是生产一种新的蛋白质来考虑人类生产生活的需要
乞求。
2.蛋白质项目的原因:基因工程技术只能生产自然界已经存在的蛋白质。
3.蛋白质工程的基本原理:可以按照人类的追求设计制造蛋白质结构,也称第二代基因工程技术。
4.基本模式:考虑估计的蛋白质功能,设计估计的蛋白质结构,推断所需的氨基酸序列,寻找
相应的脱氧核苷酸编码序列是蛋白质工程的独特方式;以下按照基因工程技术的一般流程进行。
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