多肽链 多肽链的分离
养生悦己多肽链的分离是公共卫生从业人员考试的一个重点。该网站组织如下:
在确定蛋白质的结构之前，有必要确保被测蛋白质的纯度，以使结果准确可靠。其次要知道它的分子量和亚基，根据它的亚基把蛋白质分成几个多肽链。
1)肽链的拆解
蛋白质分子多肽链的连接有两种:共价键和非共价键。必须采用化学处理方法来分解通过共价键连接的多肽链，通常包括:
过氧甲酸氧化
以过氧甲酸为氧化剂对-S-S-进行裂解。该反应通常在0℃下进行约2小时，两个S都能转化为磺酸基团，因此氧化后的半胱氨酸称为磺基丙氨酸。
如果半胱胺酸同时存在于蛋白质分子中，也会被氧化成磺基丙氨酸。此外，蛋氨酸和色氨酸也可能被氧化，从而增加了分析的复杂性。
②巯基乙醇还原
蛋白质的-S-S-也可以通过使用还原剂巯基乙醇来破碎。当高浓度巯基乙醇在pH8时？在室温下保温数小时后，-S-S-可以定量还原为h，同时反应体系中需要8摩尔尿素或6摩尔盐酸胍才能使蛋白质变性，使多肽链松散成不规则构型。这时，还原剂可以作用于-S-S-。这个反应是可逆的。因此，为了完成反应，疏水性乙醇的浓度必须为0.1-0.5摩尔。
③减少③克莱兰试剂
Cleland的研究指出，二硫苏糖醇和二硫苏糖醇是氧化还原能力比较强的试剂，仅用0.01 mol就能还原蛋白质的-S-S-了。该反应与疏水性乙醇基本相似，在许多球蛋白反应中，可以省略变性剂。
Cleland试剂首先与蛋白质-S-S-形成中间体。反应后，还原剂被氧化形成稳定的六环化合物，同时蛋白质被还原。
还原性蛋白不稳定，SH基容易氧化再生-S-S-键。稳定巯基的方法有:
烷化剂将巯基转化为稳定的硫醚衍生物。
如果用碘乙酰胺代替碘乙酸，产物S羧甲基衍生物不带电荷。磺基乙酸也可以与组氨酸、蛋氨酸和赖氨酸反应，但反应条件不同，可以通过不同的酸碱度和反应时间来控制。
氨乙基化
如果蛋白质的几个肽链通过非共价键结合，它们可以被变性剂如尿素和盐酸胍分解。蛋白质的多肽链被拆解后，进行分离纯化。常用的有凝胶过滤、离子交换、电泳等方法，这里不再赘述。
分离纯化后，应进一步分析每个肽链的末端。
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